Перейти на главную страницу
Поиск по сайту

Реакция латекс агглютинации

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ - Патент РФ 2177617 СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ - Патент РФ 2177617 СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ Суть изобретения: Изобретение относится к медицине, в частности к ветеринарии, а именно к иммунологии, и может использоваться для диагностики лептоспироза человека и животных. Способ обеспечивает раннее и быстрое обнаружение антигенов лептоспир и одновременное установление их серогрупповой принадлежности. Проводят адсорбцию одного из реакция латекс агглютинации иммунного теста на поверхности микрокапсул латекса, используемых в качестве носителя, и предусматривают в процессе приготовления воздействие ультразвуковыми колебаниями на продукты адсорбции с последующими отмывкой центрифугированием, инкубацией в холодильнике, добавлением консерванта и разливкой по флаконам. В качестве микросфер латекса используют карбоксилированные частицы, активированные карбодиимидом, при этом IgG-антитела к лептоспирам серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae адсорбируют на упомянутых частицах латекса путем обработки на ультразвуковой бане в течение 3±0,5 мин с последующим встряхиванием при температуре реакция латекс агглютинации oС и дальнейшей реакция латекс агглютинации смеси при этой же температуре. Затем продукты адсорбции отмывают дистиллированной водой центрифугированием и к полученному осадку добавляют физиологический раствор реакция латекс агглютинации первоначального объема. Патентообладатель и : Волина Елена Григорьевна; Слугин Игорь Владимирович Описание изобретения: Изобретение относится к медицине реакция латекс агглютинации ветеринарии, а именно к иммунологии, и может использоваться для диагностики лептоспироза человека и животных. Диагностика лептоспироза трудна как в связи с его клиническим полиморфизмом, так и с особенностями возбудителей, представленных лептоспирами 202 сероваров, объединенных реакция латекс агглютинации 23 серологических группы. Это реакция латекс агглютинации имеет сходную клиническую картину реакция латекс агглютинации гепатитами, геморрагической лихорадкой с почечным реакция латекс агглютинации, гриппом, брюшным и сыпным тифом и др. Поэтому при лептоспирозе нередки диагностические ошибки и только указания на характер профессиональной деятельности человека, соответствующие эпидемическая и эпизоотическая обстановка в определенной степени ориентируют клинициста. У животных лептоспирозная инфекция вообще может протекать бессимптомно и лишь появление выкидышей и мертворожденного потомства служат указанием на лептоспироз. Основой диагностики лептоспироза у людей и животных являются микробиологические исследования. Однако первый из них требует длительного времени до трех месяцев в связи с медленным размножением лептоспир время генерации до 14 чопределенных навыков работы, т. Обнаружение антител в сыворотке крови реакция латекс агглютинации в РМА является поздним методом диагностики и требует поддержания набора из 15-23 живых эталонных патогенных культур лептоспир, что не всегда возможно. Кроме того, могут наблюдаться перекрестные реакции, в результате чего возникает необходимость в проведении трудоемкого иммуноабсорбционного теста. Реакция латекс-агглютинации РЛА выполняется в планшетах в микроварианте с разведением исследуемой сыворотки, реакция латекс агглютинации позволяет выявить титр противолептоспирозных антител и динамику их накопления. Техническим результатом настоящего изобретения является разработка диагностикума для тест-системы с целью раннего и быстрого обнаружения антигенов лептоспир и одновременного установления их серогрупповой принадлежности. Поставленная цель достигается тем, что способ приготовления лептоспирозного диагностикума для постановки реакции латекс- агглютинации включает адсорбцию одного из компонентов иммунного теста на поверхности микросфер латекса, используемых в качестве носителя, и предусматривает в процессе приготовления воздействие ультразвуковыми колебаниями на продукты адсорбции с последующими отмывкой центрифугированием, инкубацией в холодильнике, добавлением консерванта и разливкой по реакция латекс агглютинации. В качестве микросфер латекса используют карбоксилированные частицы, активированные карбодиимидом, а в качестве компонента иммунного теста - IgG-антитела к лептоспирам серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae, которые адсорбируют на упомянутых частицах латекса путем обработки на ультразвуковой бане в течение 3±0,5 мин с последующим встряхиванием при температуре реакция латекс агглютинации oC и дальнейшей инкубацией смеси при той же температуре. Затем продукты адсорбции отмывают дистиллированной водой центрифугированием реакция латекс агглютинации к полученному осадку добавляют физиологический раствор до первоначального объема. Способ может характеризоваться тем, что упомянутые противолептоспирозные IgG-антитела выделены из гипериммунных сывороток кроликов путем их реакция латекс агглютинации полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000. Способ может характеризоваться также тем, реакция латекс агглютинации встряхивание проводят в течение 1,5 - 2,0 ч, а также тем, что инкубацию смеси при температуре 4±1 oC проводят в течение 4 сут. Существо изобретения состоит в том, что впервые для диагностики лептоспироза предложено адсорбировать на поверхность частиц латекса не антигены лептоспир, а противолептоспирозные антитела класса G антительный латексный диагностикум - АЛД. Это позволяет не только обнаружить лептоспирозные антигены в моче и крови животных в первые дни инфекции и у бактерионосителей, но одновременно в течение нескольких минут установить серогрупповую принадлежность возбудителя, не прибегая к использованию таких трудоемких методов, как РМА иммуноабсорбционный тест. Упомянутое дает возможность рекомендовать использование патентуемого диагностикума в тест- системе как экспресс-метода при лептоспирозной инфекции. Пример реализации В качестве микросфер латекса используют карбоксилированные частицы, активированные карбодиимидом. IgG-антитела к лептоспирам серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae выделены из гипериммунных сывороток кроликов путем их обработки полиэтиленгликолем ПЭГ 6000. Их адсорбируют на микросферах латекса путем обработки на ультразвуковой бане в течение 3 мин с последующим встряхиванием в течение 2 ч при температуре 4 oС. Дальнейшая инкубация полученной смеси реакция латекс агглютинации в течение 4 сут при той реакция латекс агглютинации температуре. К полученному осадку добавляют физиологический раствор до первоначального объема. В качестве консерванта используют раствор азида натрия в конечной концентрации 0,05%. Определение активности и реакция латекс агглютинации тест-системы. Для определения активности полученных АЛД анти-Canicola и анти-Icterohaemorrhagiae по 0,02 мл каждого АЛД смешивали на стекле с равным объемом культуры лептоспир Каширский серогруппа Canicola и М-20 серогруппа Icterohaemorrhagiae. Контролем служила 10%-ная водно-сывороточная среда для культивирования лептоспир. В положительном случае визуально регистрировалась агглютинация частиц латекса. Отмечали время появления агглютината. АЛД анти-Canicola не агглютинировал культуру М-20 lcterohaemorrhagiae и наоборот. Для определения специфичности данной тест-системы ставили РЛА с эталонными штаммами патогенных лептоспир 15 серогрупп, которые наиболее часто встречаются на территории нашей страны. Установлено, что агглютинация АЛД анти-Canicola происходила только в присутствии лептоспир HondUtrecht IV реакция латекс агглютинации Canicolaа АЛД анти-Icterohaemorrhagiae только при взаимодействии с культурой М-20 Icterohaemorrhagiae. С лептоспирами других серогрупп реакция была отрицательной. Эти результаты свидетельствуют о том, что приготовленные АЛД обладают серогрупповой специфичностью. Пять белых мышей внутрибрюшинно инфицировали культурой лептоспир Каширский и пять - культурой лептоспир М-20 Icterohaemorrhagiae. Кровь из сердца инфицированных реакция латекс агглютинации, взятую при вскрытии животных через 30, 90, 120, 150 мин, засевали в 10%-ную водно-сывороточную среду исследовали в РЛА, которую ставили следующим образом. На предметное стекло наносили две капли цитратной крови инфицированной мыши, к каждой из которых добавляли по капле дистиллированной воды. После того, как наступал гемолиз эритроцитов, в одну каплю вносили АЛД анти-Canicola, а в другую - АЛД анти-lcterohaemorrhagiae. Контролем служила капля цитратной крови неинфицированной мыши. Учитывали время появления агглютинации латексных частиц в положительных случаях. Результаты представлены в таблице. Полученные данные свидетельствуют о высокой чувствительности и специфичности предложенной тест-системы на основе АЛД анти-Canicola и анти-lcterohaemorrhagiae. Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза. Методические рекомендации Реакция латекс агглютинации РФ. Evaluation of a hemogglutination test for human leptospirosis. Immunodispersive Test-System for diagnosis of leptospirosis. VII Europian and IX USSR leptospirosis research conference. Development of simple serological method for diagnosing Leptospirosis: a microcapsule agglutination test. The sensitivities of different immunoassay for detecting Leptospiral Antigen. Providing the presence of leptospiric antigen in the реакция латекс агглютинации of diseased animals by means of complement fixation test. Выявление антигенов лептоспир в биологических жидкостях и окружающей среде. Способ приготовления лептоспирозного диагностикума для постановки реакции латекс-агглютинации, включающий адсорбцию одного из компонентов иммунного теста на поверхности микросфер латекса, используемых в качестве носителя, и предусматривающий в процессе приготовления воздействие ультразвуковыми колебаниями на продукты адсорбции с последующими отмывкой центрифугированием, инкубацией в холодильнике, добавлением консерванта и разливкой по флаконам, отличающийся тем, что в качестве микросфер латекса используют карбоксилированные частицы, активированные карбодиимидом, а в качестве компонента иммунного теста - IgG-антитела к лептоспирам серогрупп Сanicola и Icterohaemorrhagiae, которые адсорбируют на упомянутых карбоксилированных частицах латекса путем обработки на реакция латекс агглютинации бане в течение 3±0,5 мин с последующим встряхиванием при температуре 4±1 oС и дальнейшей инкубацией смеси при этой же температуре, затем продукты адсорбции отмывают дистиллированной водой центрифугированием и к полученному осадку добавляют физиологический раствор до первоначального объема. Способ по любому из пп. Способ по любому из пп. Способ по любому из пп.


Другие статьи на тему:



 
Copyright © 2006-2016
oglion.ru